生鲜乳中兽药残留的快速筛查与风险预警体系构(2)
1.2.2 前处理方法
前处理方法参照文献[23],具体步骤如下:①精确称取生鲜乳样品2.00 g 于50 mL 离心管中,混合振荡3 min后静置10 min;②加入1.0 g 氯化钠和1.0 g 无水硫酸钠,振荡1 min;③准确加入10 mL的乙腈,涡旋振荡处理5 min,于10 000 r/min 离心5 min,转移上清液至另一50 mL 离心管中;④再加入10 mL 的乙腈溶液重新提取一次,同样条件离心后上清液合并;⑤再加入10 mL 乙酸乙酯提取一次,同样离心条件离心后合并上清液,于50 ℃旋转蒸发至最小体积,用1 mL 甲醇复溶;⑥于-20℃冷冻除脂除杂2 h 以上,取出10 000 r/min 离心5 min,过0.22 μm 有机滤膜,供高效液相色谱-高分辨飞行时间串联质谱检测。
图1 生鲜乳中兽药残留筛查流程图Fig.1 Flow chart of screening of veterinary drug residues in raw milk
1.2.3 高效液相色谱-高分辨飞行时间串联质谱检测
1)色谱条件
色谱柱为 Poroshell 120 EC-C18(3.0×150 mm,2.7 μm);柱温为30 ℃;流动相A 为0.1 甲酸-水溶液,B 为甲醇;流速为350 μL/min;进样量:5 μL;线性梯度洗脱程序见表1。
表1 线性梯度洗脱程序Table 1 Linear gradient elution program时间Time/min 流动相A Mobile phase A/% 流动相B Mobile phase B/%0.00 95 5 3.00 95 5 8.00 5 95 14.00 5 95 15.00 95 5 18.00 95 5
2)质谱条件
离子源为电喷雾离子源(electron spray ionization,ESI);扫描模式为正离子扫描(ESI+);检测方式为全离子扫描;扫描范围为100~1 000m/z;电喷雾电压为5 500 V;气帘气流速为35 L/h;雾化气流量(GSl)和辅助气流量(GS2)均为55 L/h;离子源温度为600 ℃。去簇电压为80 V:碰撞能量为10 V;离子累积加速时间为0.25 s。在此质谱条件下,增加了信息相关扫描(Information Dependent Acquisition,IDA),进一步用于监测响应值超过1 000 的化合物,得到其子离子信息,扫描范围为 50 ~1 000 m/z,去簇电压(Declustering Potential,DP)为60 V;碰撞电压(Collision Energy,CE)为(35±15)V;离子累积加速时间为0.1 s。
一级全扫描获得的高质量精确质谱数据用于筛选及定性分析,IDA 全扫描获得的二级碎片离子信息用于进一步定性确证。
1.2.4 风险预警控制图分析方法
对比分析6 个批次共300 个生鲜乳样品中筛查出的兽药残留种类,发现泼尼松(Prednisone,Pre)的检出率较高,具有普遍代表性,因此选择生鲜乳中泼尼松构建休哈特控制图。因本研究未对上海市各牧场生鲜乳中兽药残留进行定量分析,且每个批次所收集筛查的生鲜乳样本数量一定,故采用泼尼松的检出数(Number of Prednisone Detected,Pn)控制图进行构建风险预警体系。
2 结果与分析
2.1 生鲜乳中多种兽药残留的快速筛查
2.1.1 筛查结果统计
试验检测方法采用前期研究建立并优化的方法[24],图2 展示了300 个生鲜乳样品中筛查出的兽药种类和数量。由图2 可知,所有兽药残留共计42 种,涉及到的兽药种类共12 类。类固醇类兽药是所有生鲜乳兽药残留筛查中检出种类最多的兽药,共12 种;其次是糖皮质激素类,共6 种;镇静剂与喹诺酮类各5 种。6 批生鲜乳样品中,每批次都筛查出的兽药有6 种,包括噻苯哒唑(Thiabendazole,Thi)、烯丙孕素(Altrenogest,Alt)、倍氯米松(Beclomethasone,Bec)、咔唑心安(Carazolol,Car)、甲基睾酮(Methyltesterone,Met)、诺乙雄龙(Norethandrolon,Nor)。具体的兽药检出汇总情况见表2。
图2 上海市牧场生鲜乳样品兽药残留检出种类和数量分布Fig.2 Type and quantity distribution of veterinary drug residues detected of raw milk samples from Shanghai pastures
表2 各批次上海市牧场生鲜乳样品兽药残留检出汇总Table. 2 Summary of veterinary drug residues detected in raw milk samples from Shanghai pastures by batch批次 No. 兽药的种类 Types of veterinary drugs 兽药名称 Name of veterinary drugs 检出的次数 Numbers of detection 检出的比例 Detection ratio/% 群勃龙Trenbolone (Tre) 1 2.0 类固醇类 Steroids 皮质醇Hydrocortisone (Hyd) 1 2.0 群勃龙Trenbolone (Tre) 1 2.0 皮质醇Hydrocortisone (Hyd) 1 2.0 糖皮质类 Gucocorticoids 醋酸氢化可的松 Hydrocortisone acetate (Hya) 2 4.0 氢化可的松Cortisol (Cor) 2 4.0 镇静剂Traquilizer 泼尼松Prednisone (Pre) 2 4.0 β-兴奋剂Beta-stimulant 异丙嗪Promethazine (Pth) 6 12.0 1 林可酰胺 Incosamade 丙嗪Promazine (Pro) 1 2.0 沙美特罗Salmeterol (Sal) 1 2.0 类固醇类 Steroids 吡利霉素Pirlimycin (Pir) 1 2.0 醋酸美仑孕酮Melengestrol acetate (Mea) 5 10.0 糖皮质类 Gucocorticoids 皮质醇Hydrocortisone (Hyd) 1 2.0 泼尼松Prednisone (Pre) 2 4.0 喹诺酮类 4-quinolones 氢化可的松Cortisol (Cor) 1 2.0 镇静剂 Traquilizer 达氟沙星Danofloxacin (Dan) 1 2.0 磺胺类 Sulfe drugs 环丙沙星Ciprofloxacin (Cip) 1 2.0 β-兴奋剂 Beta-stimulant 阿扎哌醇Azaperol (Aza) 2 4.0 β-内酰胺 Beta-lactam 甲氧苄啶 Trimethoprim (Tri) 2 4.0 沙丁胺醇Salbutamol (Sab) 1 2.0 2 抗球虫剂 Antiooccidial drugs 阿莫西林Amoxicillin (Amo) 1 2.0 盐霉素Salinomycin (Sam) 14 28.0 莫能菌素Monensin (Mon) 2 4.0 皮质醇Hydrocortisone (Hyd) 2 4.0 诺龙 Nandrolone (Nan) 1 2.0 去甲睾酮Nortestosterone (Not) 6 12.0 炔诺孕酮Norgestrel (Nol) 6 12.0 A-玉米赤霉醇A-zearalanol (Aze) 2 4.0 B-玉米赤霉醇B-zearalanol (Bze) 2 4.0 类固醇类Steroids 己烷雌酚Hexoestrol (Hex) 2 4.0 群勃龙Trenbolone (Tre) 14 28.0 醋酸美仑孕酮Melengestrol acetate (Mea) 2 4.0 糖皮质类 Gucocorticoids 氢化可的松Cortisol (Cor) 1 2.0 泼尼松Prednisone (Pre) 14 28.0 氟氢可的松Fludrocortisone (Flu) 15 30.0 镇静剂 Traquilizer 丙嗪Promazine (Pro) 1 2.0 磺胺类 Sulfe drugs 异丙嗪Promethazine (Pth) 3 6.0 阿扎哌醇Azaperol (Aza) 2 4.0 3 β-兴奋剂 Beta-stimulant 磺胺甲基嘧啶Sulfamerazine(Suf) 3 6.0
文章来源:《四川动物》 网址: http://www.scdwzzs.cn/qikandaodu/2021/0728/1605.html